高磷血癥主要發生在慢性腎病患者中，醋酸鈣片、碳酸鑭咀嚼片/顆粒、碳酸司維拉姆片/干混懸劑、枸櫞酸鐵片等，是目前治療高磷血癥的局部胃腸道作用的一線藥物，該類藥物通過在腸道內與磷結合形成沉淀，減少磷的吸收以降低體內的血磷水平。
  根據FDA個藥指南及CDE（國家藥品監督管理局藥品審評中心）建議，需進行體外溶出研究、磷酸鹽動力學結合研究和磷酸鹽平衡結合研究，以及體內臨床藥效終點研究，來評價受試制劑和參比制劑生物等效性研究。
  截至目前醋酸鈣、碳酸鑭咀嚼片或顆粒、碳酸司維拉姆干混懸劑國內已有多個廠家通過一致性評價，但枸櫞酸鐵片目前國內還未有仿制藥上市。該品種體外磷結合等效性評價的方法是非常關鍵的部分，但該研究具體有哪些挑戰及關鍵注意事項？本文將結合指導原則要求與我司前期經驗進行具體討論與分析。
  圖片來源于網絡
  一、體外磷酸鹽結合等效性評價標準
  FDA及CDE頒布的指導原則中，不同磷結合劑的體外等效性評價標準匯總如下：
  二、體外磷結合等效性挑戰
  ▍復雜代謝路徑
  枸櫞酸鐵在胃腸道中主要通過局部結合磷酸鹽發揮作用，而非系統性吸收，傳統血藥濃度檢測方法難以直接評估其生物等效性。
  ▍替代指標選擇
  需依賴體外磷酸鹽結合能力、鐵釋放速率等替代參數，結合臨床終點（如血磷下降幅度、鐵代謝指標）進行綜合判斷。
  ▍方法學局限性
  體外試驗無法完全模擬人體胃腸環境（如pH波動、食物成分干擾），需通過多批次重復試驗和交叉驗證提高數據可靠性（要求至少n=12）。
  ▍支持監管申報
  FDA和EMA、NMPA均要求提交體外結合試驗數據作為仿制藥開發的必要證據，以證明與原研藥的理化特性一致。
  三、實驗設計研究要點
  ▍磷酸鹽濃度
  結合試驗應至少包含8個不同的磷酸鹽濃度，包括達到結合平臺的最高磷酸鹽濃度，約最高磷酸鹽濃度1/10的最低磷酸鹽濃度，以及介于最高和最低之間的其余磷酸鹽濃度。
  ▍磷酸鹽動力學結合研究測定時間點
  每個條件下應在24 h內選擇至少8個時間點。需特別注意達到平臺期前的時間點不能太少，以反映受試制劑和參比制劑動力學變化趨勢。
  ▍磷酸鹽平衡結合研究濃度和孵育時間
  平衡研究磷酸鹽的濃度需結合正常體內每天攝入磷酸鹽量，制劑規格，溶液體積等綜合評定。孵育時間根據動力學達到穩態的時間進行合理選擇。
  ▍pH監控
  對于動力學和平衡試驗都需要提供詳細的pH監控方法、記錄、間隔時間等。
  四、實驗設計研究要點
  重點參考中國藥典9012《生物樣品定量分析方法驗證指導原則》，需要考察系統適用性、定量限、準確度、精密度、稀釋可靠性、耐用性、殘留、基質效應、膜吸附、穩定性等，以驗證方法準確可靠。
  干擾考察：如加入了BES等pH穩定劑來配制磷酸鹽，還需要考察BES對磷酸鹽結合的影響，另外還需要考察輔料、原料藥、空白制劑對磷酸鹽檢測的干擾。
  建議進行ISR研究，以考察方法的準確性。
  所有資料都需要按照等效性評價相關要求提供，如制劑來源、質檢報告，分析計劃、分析報告、進樣序列表、標曲質控匯總表等。
  五、體外磷結合藥動學及平衡研究曲線
  圖1碳酸鑭在pH3.0的40mM磷酸鹽體系中動力學結合曲線
  圖2枸櫞酸鐵在pH3.0和pH 7.5 40mM磷酸鹽體系中動力學結合曲線
  圖3枸櫞酸鐵在不同濃度的磷酸鹽平衡研究中Langmuir線性方程
  六、體外磷結合研究其他應用
  除了抗高磷血癥藥物外，對于可能導致低磷血癥的補鐵劑（如蔗糖鐵、羧基麥芽糖鐵），也可以通過體外磷結果試驗評估藥物與磷酸根的結合能力，從而預測其在體內引起低磷血癥的風險，為臨床用藥提供安全性依據。
  湖南科銳斯醫藥的磷酸鹽動力學和磷酸鹽平衡結合研究平臺，已成功開發了碳酸鑭咀嚼片、枸櫞酸鐵片分析方法，并已經助力客戶完成該品種體外磷酸鹽等效性評價研究。
  項目經驗：目前已完成近500個品種的生物樣本檢測，接受國家局現場核查20余次，50+個品種獲得免核查。
  專業團隊：以高級工程師領銜的核心骨干團隊成員56人，本科及以上比例100%，碩士及以上占比41%。
  質量體系：取得中國合格評定國家認可委員會（CNAS）實驗室認可證書。實驗過程采用電子化信息系（LIMS）統進行全流程的記錄管理和生物樣本管理，并建立了滿足中美雙報的中英文體系。
  特色品種：
  外用制劑：洛索洛芬鈉凝膠貼膏、丙酸氟替卡松乳膏等
  復方制劑：復方甘草酸苷等
  內源性物質：熊去氧膽酸、二十碳五烯酸等
  體外磷結合劑：枸櫞酸鐵等